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  • RWPE-2细胞技术硬人前列腺正常RWPE-2

    2018-12-26 15:19   温州大禹电器有限公司   470次浏览
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    公司主营ATCC、DSMZ、RIKEN、ScienCell、INCELL、Promocell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国内外著名大学来源细胞系及原代细胞,全程提供细胞系背景、生长特性、来源、器官、类型、形态、培养条件、应用、系、疾病、组织、冻存条件、传代方法等复苏及冻存说明书信息,我们拥有丰富的细胞系培养经验,能提供细胞培养全方位的技术支持,让您实验再无烦扰!

    公司由在国外工作和学习多年的留学人员创办,由国内中国科学院上海生物化学与细胞生物学研究所,复旦大学,同济大学等多名工作在第一线的细胞培养专家,提供细胞培养技术支持。

    公司依靠自身一些世界领先的技术和理念,以世界一流的技术支撑阵容,提供一系列细胞相关的技术服务。为中国的生命科学事业赶超欧美,提供了重要的基石。

    公司将依靠自主研究开发的高技术高质量和有绝对的价格竞争力的产品,立足国内,面向世界。力争打破国外大公司在细胞培养科学领域接近垄断的地位,为中国在生命科学的这一领域占领一席之地。

    公司筹划未来三年内,在沈阳、济南、北京、西安、宁夏、武汉、重庆等国内代表城市建立细胞培养分实验室,以便更好的服务国内广大医院、大学、制药企业等,你们的每一份关心和支持,都是我们前进的动力!

    目前,跟公司签订长期战略合作伙伴的科研单位有山西中医学院、福建医科大学附属第二医院、上海市第六人民医院、北京大学医学部、同济大学、四平中心医院、广州中医药大学、中科院上海生命科学研究院生化与细胞研究所、解放军第306医院、江南大学、西南医院、吉首大学、西南大学化学化工学院、宁波大学、福建医科大学附属第一医院、苏州市同济医院、中南大学、延安大学附属医院、中国科学院上海药物研究所、天津市儿童医院、江苏省中医药研究院、湘雅医学院、第四军医大学预防系劳动与环境教研室、扬州大学、上海交通大学、中国医科大学、浙江省立同德医院、中国人民解放军第150中心医院、苏州大学、四川大学华西医院、云南大学、扬州大学兽医学院、上海交通大学医学院附属第九人民医院、海南医学院、江苏肿瘤医院、上海市闵行区中心医院、大连医科大学附属第一医院、中国科学院广州生物医药与健康研究院、沈阳药科大学、广州市第八人民医院、南京大学、浙江中医药大学、兰州大学、上海中医药大学、中国农业科学院饲料研究所、厦门市妇幼保健院、重庆大学、南京军区总医院、天津市人民医院、北京医学科学肿瘤医院、上海市同济医院、江苏大学、桂林医学院附属医院、中国科学院化学研究所" "

    无菌操作的演示:

    凡是带入超净工作台内的酒精、PBS、培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用75%酒精擦拭瓶子的外表面

    靠近酒精灯火焰操作。

    器皿使用前必须过火灭菌

    继续使用的器皿(如瓶盖、滴管)要放在高处,使用时仍要过火。 各种操作要靠近酒精灯,动作要轻、准确,不能乱碰。如吸管不能碰到废液缸。

    吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管,防止交叉污染。

    器械的清洗和消毒

    玻璃器械洗消:

    一、新的玻璃器皿的洗消:

    自来水刷洗,除去灰尘。

    烘干、泡盐酸:烤箱中烘干,然后再浸入5%稀盐酸中12小时以除去脏物、铅、砷等物。

    刷洗、烘干:12小时后立即用自来水冲洗,再用洗涤剂刷洗,自来水冲干净后用烤箱烘干。

    泡酸、清洗:用清洁液(重铬酸钾120g:浓硫酸200ml:蒸馏水1000ml)浸泡12小时,然后从酸缸内捞出器皿用自来水冲洗15次,最后蒸馏水冲洗3-5次和用双蒸水过3次。

    烘干、包装:洗干净后先烘干,然后用牛皮纸(油光纸)包装。 高压消毒:包装好的器皿装入高压锅内盖好盖子,打开开关和安全阀,当蒸气成直线上升时,关闭安全阀,当指针指向15磅时,维持20-30分钟。

    高压消毒后烘干

    二、旧的玻璃器皿的洗消:

    刷洗、烘干:使用过的玻璃器皿可直接泡入来苏尔液或洗涤剂溶液中,泡过来苏尔溶液(洗涤剂)的器皿要用清水刷洗干净,然后烘干。

    泡酸、清洗:烘干后泡入清洁液(酸液),12小时后从酸缸内捞出器皿立即用自来水冲洗(避免蛋白质干涸后粘附于玻璃上难以清洗),再用蒸馏水冲洗3次。

    烘干、包装:洗干净的器皿烘干后取出用牛皮纸(油光纸)等包装。" "

    培养细胞的冻存及复苏:

    细胞低温冻存是培养室常规工作和通用技术。细胞冻存在-196℃液氮中,储存时间几乎是无限的。细胞冻存及复苏的原则是慢冻快融。

    1. 冻存细胞

    (1)选对数增生期细胞(证明无支原体污染),在冻存前1d换液。

    (2)按常规方法把培养细胞制备成悬液,计数,使细胞密度达5×10/ml左右密度,离心,去上清。

    (3)加入配制好的冻存液(培养液6.8ml,小牛血清2ml,DMSO 1ml,5.6%NaHCO3 0.1ml),按与去上清相同的量一滴一滴加入离心管中,然后用吸管轻轻吹打令细胞重悬。冻存细胞时培养液中加入保护剂10%二甲基亚砜(DMSO)或甘油,可使冰点降低,使细胞内水分在冻结前透出细胞外。

    (4)分装于无菌冻存管中,每管加1.5m悬液。

    (5)旋好冻存管并仔细检查,一定要盖紧,做好标记。

    (6)冻存:在特殊的仪器或简易的液氮容器中,按-1℃/min的速度,在30~40min时间内,下降到液氮表面,再停30min后,直接投入液氮中。要适当掌握下降冷冻速度,过快能影响细胞内水分透出,太慢则促进冰晶形成。

    操作时应戴防护眼镜和手套,以免液氮冻伤。

    2.复苏细胞

    (1)从罐中取出冻存管。

    (2)迅速放入36℃~37℃水浴,不时摇动,使其急速融化,30~60s内完成。

    (3)冻存管用70%酒精擦拭消毒后,打开盖子,用吸管将细胞悬液注入离心管中,再滴加10ml培养液。

    (4)低速离心(500~1000r/min) 5min,去上清后再用培养液洗一次。

    (5)用培养液适当稀释后,装入培养瓶37℃培养,次日更换一次培养液后,继续培养。以后仍按常规进行培养。

    冻存细胞数量要充分,密度应达到10/ml,在融后稀释20倍时,仍能保持5×10/ml数量。"

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